凯氏定氮法（KjeldahlMethod）是分析有机化合物中总氮含量的经典方法，其核心在于通过化学反应将有机氮转化为无机氮，再通过滴定法测定氮含量，最终推算蛋白质含量。该方法基于蛋白质中氮的平均占比约为16%（12%~19%），因此通过氮含量可间接估算蛋白质含量。
化学原理
消化阶段：样品与浓硫酸（H₂SO₄）在催化剂（如硫酸铜CuSO₄、硫酸钾K₂SO₄）作用下共热，有机物被氧化分解。蛋白质中的碳、氢元素转化为二氧化碳（CO₂）和水（H₂O），氮元素则转化为氨（NH₃），并与硫酸结合生成硫酸铵（(NH₄)₂SO₄）。此阶段的关键是分解有机物，确保所有氮转化为硫酸铵。
蒸馏阶段：向消化液中加入过量氢氧化钠（NaOH），使溶液呈强碱性，硫酸铵与碱反应生成氨气（NH₃）。通过蒸馏装置，氨气随水蒸气蒸出，并被硼酸（H₃BO₃）溶液吸收，生成硼酸铵（(NH₄)₂B₄O₇）。
滴定阶段：用已知浓度的硫酸（H₂SO₄）或盐酸（HCl）标准溶液滴定硼酸铵，发生中和反应生成硫酸铵或氯化铵，同时释放硼酸。通过消耗的酸量，可计算出样品中氮的摩尔量。
计算公式
氮含量（%）=(标准酸消耗量×酸浓度×14)/样品质量×100%
蛋白质含量（%）=氮含量×换算系数（通常为6.25）
凯氏定氮法因高精度与广泛适用性，成为食品、饲料等领域蛋白质测定的标准方法，但其本质是测定总氮量，需注意非蛋白质含氮化合物的干扰。
